迷你垂直轉(zhuǎn)印電泳槽使用前要做好哪些準(zhǔn)備工作?
更新時(shí)間:2023-06-02 點(diǎn)擊次數(shù):550
垂直轉(zhuǎn)印電泳槽是生物學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域中常用的實(shí)驗(yàn)儀器,用于將蛋白質(zhì)和核酸從凝膠中轉(zhuǎn)移到膜上。迷你垂直轉(zhuǎn)印電泳槽通常由兩部分組成:電泳槽和轉(zhuǎn)印模塊。電泳槽由兩個(gè)平行的電極板和中間的凝膠支架組成。轉(zhuǎn)印模塊包括一個(gè)轉(zhuǎn)印池和一個(gè)膜支架。凝膠支架和膜支架可以調(diào)節(jié)高度,以適應(yīng)不同厚度的凝膠和膜。
在使用之前,首先需要制備樣品和凝膠。樣品可以是蛋白質(zhì)或核酸,可以通過(guò)各種技術(shù)進(jìn)行提取和純化。凝膠則根據(jù)需要選擇合適的類(lèi)型和濃度,例如聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)或瓊脂糖凝膠(agarosegel)。
制備好凝膠后,將其放入電泳槽中,并加入足夠的電泳緩沖液。將樣品加入凝膠槽中,然后使用電流進(jìn)行分離。在分離結(jié)束后,將凝膠移動(dòng)到轉(zhuǎn)印模塊中。將膜放置在凝膠上方,并用夾子固定在膜支架上。將轉(zhuǎn)印池中的轉(zhuǎn)印緩沖液加入到膜和凝膠之間,并施加適當(dāng)?shù)膲毫?,使得樣品從凝膠中轉(zhuǎn)移到膜上。
迷你垂直轉(zhuǎn)印電泳槽的優(yōu)點(diǎn)是其尺寸小巧,儀器體積較小,操作簡(jiǎn)單方便。此外,它還可以用于快速檢測(cè)極少量的樣品,如核酸或蛋白質(zhì)。應(yīng)用非常廣泛。其中一項(xiàng)重要應(yīng)用是蛋白質(zhì)的免疫印跡(westernblotting)。通過(guò)將蛋白質(zhì)從凝膠上轉(zhuǎn)移到膜上,然后使用特定的抗體進(jìn)行探針處理,可以確定樣品中蛋白質(zhì)的存在和數(shù)量。
迷你垂直轉(zhuǎn)印電泳槽還可用于DNA或RNA的南方雜交(Southernblotting)和北方雜交(Northernblotting)。通過(guò)將DNA或RNA從凝膠上轉(zhuǎn)移到膜上,然后使用特定的探針進(jìn)行探測(cè),可以確定樣品中的特定基因序列。