PCR基因擴(kuò)增儀的“位置的邊緣效應(yīng)”實(shí)驗(yàn)過(guò)程
更新時(shí)間：2021-12-03 點(diǎn)擊次數(shù)：2568
PCR基因擴(kuò)增儀又稱為PCR基因擴(kuò)增儀、PCR核酸擴(kuò)增儀、聚合酶鏈反應(yīng)核酸擴(kuò)增儀，是利用PCR(Polymerasechainreaction，聚合酶鏈反應(yīng))技術(shù)對(duì)特定DNA擴(kuò)增的一種儀器設(shè)備，被廣泛運(yùn)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中，例如用于判斷檢體中是否會(huì)表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復(fù)制以及親子鑒定等。
PCR基因擴(kuò)增儀“位置的邊緣效應(yīng)”實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
PCR基因擴(kuò)增儀主要是利用DNA聚合酶對(duì)特定基因做體外或試管內(nèi)InVitro的大量合成，用DNA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖復(fù)制。PCR儀的原理為利用升溫使DNA變性，用限制性內(nèi)切酶使DNA雙鏈解鏈，在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈，進(jìn)而達(dá)到基因復(fù)制的目的。
PCR原理為雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶的作用下，以單鏈為模版，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成新的單鏈，與模版配對(duì)成為雙鏈分子挎貝。在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)與模板DNA的5’端結(jié)合的兩條引物，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制，多次重復(fù)“變性解鏈—退火—合成延伸”的循環(huán)就可以以幾何級(jí)數(shù)大量擴(kuò)增特定的基因。這就是PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程.
想得到一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果,zui關(guān)鍵所使用的PCR基因擴(kuò)增儀,溫度均性是否穩(wěn)定均勻.PCR溫度均勻是指樣品孔間的溫度差異，它關(guān)系到在不同樣品孔進(jìn)行反應(yīng)結(jié)果的一致。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有時(shí)用同樣的樣品，同樣的PCR反應(yīng)程序，zui后的結(jié)果竟然差異非常明顯，或許就是因?yàn)椴煌恢玫臏囟炔痪恍运?。所以一些?shí)驗(yàn)人在做實(shí)驗(yàn)中就固定用著那幾個(gè)孔，就是因?yàn)檫^(guò)往反復(fù)的教訓(xùn)和認(rèn)真的思索得出的結(jié)果.這個(gè)被我們稱為“位置的邊緣效應(yīng)”,即原因就是PCR儀的溫度均勻性不好，特別是zui外周的樣品孔，溫度不均勻就會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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